...de imunofluorescência direta para o diagnóstico de tracoma

来自 : www.researchgate.net/publicati 发布时间：2021-03-25

Rev. Saúde Pública, 30 (2), 1996137Diagnóstico laboratorial de tracomaMedina, N. H. et al.Tabela 1 - Distribuição das lâminas de Imunofluorescência direta para Chlamydia trachomatis, segundo quantidade decélulas epiteliais por número de corpúsculos elementares (EBs), Estado de São Paulo, 1991.EBsNúmero de 0 1 – 23 – 45 – 9 10 ou + Totalcélulas ——————— ——————— ——————— ——————— ——————— ———————nº %nº %nº %nº %nº %nº %0-99 céls. 106 (49,5) 26 (31,7) 6 (17,1) 6 (16,2) — —144 (37,4)100 ou + céls. 108 (50,5) 56 (68,3) 29 (82,9) 31 (83,8) 17 (100,0) 241 (62,6)Total 214 (100,0) 82 (100,0) 35 (100,0) 37 (100,0) 17 (100,0) 385 (100,0)MATERIAL E MÉTODOFoi colhido material de raspado da conjuntiva tarsalsuperior de indivíduos com diagnóstico clínico de tracomainflamatório (TF/TI), durante as investigações realizadaspela vigilância epidemiológica da SES/SP, no período dejaneiro de 1990 a dezembro de 1991.Os examinadores receberam instruções teórico-práti-cas para reconhecer e classificar clinicamente os casos detracoma segundo o critério preconizado pela OrganizaçãoMundial de Saúde21. Todos examinadores foram padroni-zados com nível de concordância de 80% dos diagnósticoscom o monitor e também foram treinados para realizar co-leta para o exame laboratorial.Realizou-se coleta de raspado conjuntival da pálpebrasuperior evertida, sendo o swab esfregado por 10 vezes. Omaterial obtido foi depositado no círculo da lâmina própria,deixou-se secar e fixou-se com metanol. As lâminas foramtransportadas em caixas de isopor com gelo reciclável e fi-caram estocados a -20oC até o processamento e a leitura.O material foi examinado no Instituto Adolfo Lutz -Central por técnicos com experiência na execução da leitu-ra pela reação de imunofluorescência direta.Os esfregaços foram corados utilizando-se 25 µl de anti-corpos monoclonais conjugados à fluoresceína, dirigidoscontra a principal proteína da membrana externa (MOMP),presente nos corpúsculos elementares (EBs) dos 15sorotipos da Chlamydia trachomatis16.Após 30 min de incubação em câmara úmida, à tempe-ratura ambiente, as lâminas foram lavadas com água desti-lada e secas ao ar.As lâminas foram examinadas em microscópio fluo-rescente com epi-iluminação, inicialmente com aumentode 400 vezes, visando ao rastreamento dos EBs, que seapresentavam como corpúsculos verdes fluorescentes ca-racterísticos, os quais foram confirmados em aumento demil vezes.Os esfregaços foram analisados quanto ao número decélulas epiteliais, com o objetivo de avaliar sua qualidade,sendo agrupados em:• menos de 100 células epiteliais;• 100 ou mais células epiteliais;• 200 ou mais células epiteliais.Para avaliação dos resultados, utilizou-se a sensibili-dade do teste que é a relação entre o número de resultadospositivos e o número total de lâminas examinadas e testesestatísticos de significância.RESULTADOSForam avaliadas 385 lâminas colhidas em diver-sos municípios do Estado de São Paulo. Do total delâminas analisadas, 54 (14,0%) apresentaram 200células ou mais; 187 (48,6%) apresentaram de 100 a199 células e 144 (37,4%) apresentaram menos que100 células.Segundo a Tabela 1, das 214 lâminas que nãoapresentam EBs, 106 (49,5%) continham menos que100 células epiteliais; das 82 lâminas que apre-sentaram 1 a 2 EBs, 56 (68,3%) continham 100 oumais células; das 35 lâminas que apresentaram 3 a 4EBs, 29 (82,9%) continham 100 ou mais células; das37 lâminas apresentando 5 a 9 EBs, 31 (83,8%) con-tinham 100 ou mais células, e das 17 lâminas apresen-tando 10 ou mais EBs, 17 (100%) continham 100 oumais células.O comportamento do IFD utilizando-se diferen-tes critérios de positividade do teste e quantidade decélulas epiteliais existentes no esfregaço encontra-se na Figura. A maior sensibilidade encontrada parao teste de IFD foi de 55,6% nas lâminas contendo200 células ou mais, utilizando-se o critério de 1 oumais EBs como positivo. A sensibilidade do IFD foidiminuindo conforme a mudança do critério depositividade para 3 EBs (35,2%), 5 EBs (27,8%) e10 EBs (12,9%).Os valores da sensibilidade encontrados para aslâminas com 100 ou mais células foram menores queas das lâminas com 200 ou mais células, indepen-dente do critério de positividade adotado, porém es-tas diferenças não foram estatisticamentesignificantes (p 0,005).As lâminas com menos de 100 células apresenta-ram sensibilidades que variaram de 26,4%, quandoo critério de positividade foi igual a 1 ou mais EBs,a zero, quando o critério de positividade foi igual 10ou mais EBs. A sensibilidade do teste nessas lâminasfoi consideravelmente menor do que a das lâminascom 100 ou mais células e 200 ou mais células, uti-lizando-se qualquer um dos critérios de positividade.